1. Konsentrasi enzim
Seperti pada katalis lain, kecepatan suatu reaksi yang menggunakan enzim tergantung pada konsentrasi enzim tersebut. Kecepatan reaksi akan bertambah dengan bertambahnya konsentrasi enzim.
2. Konsentrasi substrat
Dengan konsentrasi enzim yang tetap, maka pertambahan konsentrasi substrat akan menaikkan kecepatan reaksi. Tetapi pada batas konsentrasi tertentu tidak terjadi kenaikan kecepatan reaksi walaupun konsentrasi substrat diperbesar.
3. Suhu
Sama seperti reaksi kimia pada umumnya, reaksi yang menggunakan katalis enzim juga dipengaruhi oleh suhu. Pada suhu rendah reaksi kimia berlangsung lambat, sedangkan pada suhu yang lebih tinggi berlangsung lebih cepat. Apabila terjadi proses denaturisasi, maka bagian aktif enzim akan terganggu, sehingga konsentrasi efektif enzim menjadi berkurang dan kecepatan reaksi menurun. Kenaikan suhu sebelum terjadi proses denaturisasi akan mengurangi kecepatan reaksi. Dengan demikian ada titik optimum yang dipunyai oleh enzim tersebut, yaitu pada suhu yang paling tepat untuk reaksi enzim yang disebut suhu optimum. Tiap enzim mempunyai suhu optimum tertentu.
4. pH
Seperti pada protein enzim dapat berbentuk ion positif, ion negatif atau ion bermuatan ganda(zwitter ion) sehingga perubahan pH lingkungan akan berpengaruh terhadap efektivitas bagian aktif enzim dalam membentuk kompleks enzim-substrat. Seperti juga pada suhu, pada pH optimum yang dipunyai enzim tersebut. Dengan kata lain, ada pH tertentu atau daerah pH yang dapat menyebabkan kecepatan reaksi paling tinggi.
5. Pengaruh inhibitor
Apabila ada substansi lain yang menghambat selaim enzim-substat berikatan dengan bagian aktif, maka keaktifan katalis akan hilang dan enzim tersebut disebut diinhibisi oleh inhibitor. Dalam beberapa kasus, inhibisi ini merupakan irreversibel. Ini dapat terjadi apabila terjadi ikatan permanen antara inhibitor dan enzim, misalnya pada diisopropilfluorofosfat.